Cách để xét nghiệm ELISA phát hiện kháng thể COVID-19

Xét nghiệm kháng thể, còn được gọi là xét nghiệm huyết thanh học, là một chẩn đoán bổ sung quan trọng về COVID-19. Ngoài xét nghiệm axit nucleic, xét nghiệm kháng thể có thể giúp không những độ chính xác của chẩn đoán mà còn đặc tính cho tốc độ lưu hành và lây lan của dịch bệnh. Xét nghiệm kháng thể sẽ xác định xem một người đã tiếp xúc với SARS-CoV-2 và đã phát triển khả năng miễn dịch chống lây nhiễm SARS-CoV-2, phù hợp hơn cho việc giám sát sức khỏe cộng đồng và phát triển vắc-xin.

Hệ thống xét nghiệm miễn dịch Elisa tự động

Cho đến nay, FDA đã ban hành Sử dụng ủy quyền khẩn cấp cho 12 xét nghiệm kháng thể, bao gồm 3 xét nghiệm máu keo vàng, 4 xét nghiệm phát quang hóa học và 5 xét nghiệm ELISA. Do tính cấp bách và nhu cầu, phát triển rất nhiều xét nghiệm kháng thể nhanh chóng và cung cấp trên thị trường với xác nhận hạn chế. Để giải quyết vấn đề này, một số nhà khoa học đang đánh giá các xét nghiệm này bằng các mẫu lâm sàng. Trong bài viết này, chúng tôi sẽ xem xét kỹ về hiệu suất của các xét nghiệm ELISA. (Tìm hiểu thêm về hiệu suất của phương pháp keo vàng và phát quang hóa học).

Công ty TNHH Dược phẩm sinh học Bắc Kinh Wantai đã phát triển 3 bộ xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA) chống lại tổng số kháng thể (Ab), IgM và IgG của SARS-CoV-2. Tóm lại, ELISA cho Ab được phát triển dựa trên ELISA sandwich kháng nguyên kép, sử dụng miền liên kết thụ thể tái tổ hợp tế bào động vật có vú (RBD) của protein tăng đột biến của SARS-CoV-2 và kháng nguyên liên hợp HRP. ELISA bắt chuỗi Ig IgM được sử dụng để phát hiện các kháng thể IgM sử dụng cùng kháng nguyên liên hợp HRP. Các kháng thể IgG được đo bằng bộ ELISA gián tiếp dựa trên protein nucleocapsid tái tổ hợp.

173 bệnh nhân đã tham gia vào nghiên cứu này. Tỷ lệ chuyển đổi huyết thanh cho Ab, IgM và IgG lần lượt là 93,1% (161/173), 82,7% (143/173) và 64,7% (112/173). Mười hai bệnh nhân vẫn còn huyết thanh cho xét nghiệm Ab có thể do các mẫu liên quan của họ đều được thu thập ở giai đoạn đầu của bệnh. Độ đặc hiệu của các xét nghiệm đối với Ab, IgM và IgG được xác định là 99,1% (211/213), 98,6% (210/213) và 99,0% (195/197) bằng cách sử dụng các mẫu thu thập từ những người khỏe mạnh.

Hiệu suất của các xét nghiệm ELISA khác nhau và cũng phân tích xét nghiệm axit nucleic trong các mẫu với thời gian mắc bệnh khác nhau. Khi thời gian bị bệnh tăng lên, độ nhạy của các xét nghiệm ELISA tiếp tục tăng và vượt qua so với xét nghiệm axit nucleic sau ngày thứ 8.

Cuối cùng, người ta tin rằng, việc sử dụng kết hợp xét nghiệm axit nucleic và xét nghiệm ELISA cải thiện rõ rệt độ nhạy của chẩn đoán COVID-19 trong các giai đoạn khác nhau.

Một nhóm nghiên cứu khác đến từ Đan Mạch cũng đã điều tra hiệu suất của 3 bộ dụng cụ ELISA có bán trên thị trường, bao gồm bộ ELISA Wantai Ab mà chúng tôi vừa đề cập và hai bộ ELISA từ Euroimmun (tương ứng IgG và IgA), đã đạt được EUA từ FDA vào tháng 5. Các kháng thể IgA hoặc IgG chống lại tiểu đơn vị protein tăng đột biến SARS-CoV-2 1 (S1) được phát hiện bằng cách sử dụng định dạng ELISA gián tiếp.

Theo phân phối dữ liệu ELISA, các điểm dữ liệu dương và âm là khác biệt đối với xét nghiệm Wantai tổng Ab, với giá trị giới hạn trên tất cả các mẫu huyết thanh đối chứng, giải thích không rõ ràng. Ngược lại, dữ liệu xét nghiệm Euroimmun IgA và IgG có sự phân tách khác biệt một chút.

Nhìn chung, tổng Ab ELISA của Wantai có độ nhạy và độ đặc hiệu vượt trội so với cả ELISAs Euroimmun IgA và IgG. Độ nhạy thấp hơn đáng kể để phát hiện IgG đặc hiệu SARS-CoV-2 phù hợp với nghiên cứu trước đây mà chúng tôi đã đề cập (bộ ELISA Wantai IgG). Khả năng toàn bộ độ nhạy của ELISAs-Sars -CoV-2 IgG thấp hơn có thể xuất hiện phổ quát hơn.

Ngoài độ nhạy thấp hơn, các ELISAs Euroimmun IgA và IgG cũng dễ bị phản ứng chéo với các mẫu huyết thanh âm tính. Hiệu suất khác nhau giữa các xét nghiệm có thể được giải thích một phần bằng định dạng ELISA và các kháng nguyên họ đã sử dụng. Các protein nucleocapsid và spike là thuốc thử quan trọng cho bộ phát hiện kháng thể, có thể ảnh hưởng lớn đến hiệu suất của xét nghiệm.

ACROBiosystems đã phát triển S1, N, vùng liên kết với thụ thể (RBD) loại hoang dã cũng như các protein RBD đột biến với các thẻ khác nhau bao gồm His, Fc, mFc và His & Avi, phù hợp cho phát triển xét nghiệm huyết thanh học COVID-19. Có thể áp dụng những protein này cho phương pháp keo vàng, phương pháp phát quang hóa học và phương pháp ELISA. ACRO đang thu được nhiều phản hồi tích cực về protein kháng nguyên SARS-CoV-2 chất lượng cao.

Đỗ Quyên dịch

Nguồn: Hệ thống sinh học Acro – Hoa Kỳ